这种情况似乎几乎发生在每个网站上，无论是 ASP 还是 .NET 网站。如果您在出现该错误后立即刷新，它就会消失，并且不会因为多次刷新而再次出现。我有两台服务器正在为 IIS 进行负载平衡。编辑这些也是文件夹名称的有效路径。这些页面连接到另一台服务器上的 Microsoft SQL 数据库。应用程序池设置为对所有 A 网站以及字母表中的其他每个字母使用不同的域用户，如 Microsoft 所指示的那样。每个网站都有自己的应用程序池。编辑 
答案1
尝试“不”对服务器进行负载平衡，以查看其中一台服务器是否负责。
答案2
该错误还显示“错误代码 0x80070035”，Microsoft 网站上对此进行了详细说明：http://support.microsoft.com/kb/942031。
该错误的基本含义是“拒绝访问”，IIS 无法访问该文件夹，我首先要检查该文件夹的权限。您需要确保 IIS 至少对该文件夹及其中的文件具有读取权限。如果该网站使用脚本，您可能还希望允许对脚本具有执行权限。
答案3
我原来的答案被错误吞噬了，因此这里是简短的版本：
错误表明可能是权限问题，但这似乎是基于当时尝试执行的操作而做出的假设。连接性似乎是另一个可能的原因。
该错误来自静态文件处理程序，这意味着任何活动内容均未执行；请求尚未通过身份验证。因此，应用代码并未涉及此问题。
内容似乎位于 UNC 共享上。
“所有网站”都在同一台服务器上吗？
该问题真的影响“所有网站”还是仅影响“该文件服务器上的所有网站”？（这是同一件事吗？）
您能否本地移动一个或多个站点以查看是否能解决问题？
网络捕获看起来像可能如果它涵盖问题实例，则提供帮助。
如果有任何相关条目，应用程序事件日志可能也会有所帮助。
简而言之：可能是客户端（IIS）和文件服务器之间的关系并不总是很好；假设与 SMB 相关的尽职调查（MaxCmds 等）已经解决，那么查看与网络相关的问题似乎是正确的方法。